GENOMIC VISION : Des avancées dans la recherche sur le cancer avec la technologie Genomic VIsion

LEADEROR

16 nov. 2020 •17:56

https://journals.plos.org/plosgenetics/article?id=10.1371/journal.pgen.1009176

Extrait article libre d'accès d'une équipe de recherche du Département de biochimie et de biologie moléculaire, Collège de médecine de l'Université d'État de Pennsylvanie :

Les cellules cancéreuses s'appuient sur la voie de réponse au stress de réplication ATR pour assurer la réplication de l'ADN et la prolifération cellulaire continue. En tant que tels, les inhibiteurs de l'activité ATR kinase représentent de nouveaux médicaments anticancéreux prometteurs. Cependant, la sensibilité des tumeurs à ces médicaments peut être fortement influencée par leur profil génomique. Pour résoudre ce problème, nous avons utilisé le double criblage génétique CRISPR knockout et activation à l'échelle du génome pour cataloguer les déterminants génétiques de la résistance cellulaire à plusieurs inhibiteurs d'ATR. Nous avons identifié plusieurs mécanismes qui contrôlent cette résistance, y compris la régulation de l'apoptose et la stabilisation de la stabilité de la fourche de réplication. Nos travaux jettent les bases d'un déploiement personnalisé des inhibiteurs d'ATR dans le traitement du cancer.

Les cellules HeLa ont été traitées avec de l'ARNsi comme indiqué, puis incubées avec 100 uM d'IdU dans du DMEM pendant 30 minutes. Les cellules ont ensuite été lavées trois fois avec du PBS et incubées avec 100 uM de CldU et VE822 comme indiqué, dans du DMEM pendant 30 minutes. Ensuite, les cellules ont été collectées et traitées en utilisant le kit FiberPrep (Genomic Vision EXT-001) selon les instructions du fabricant. Les molécules d'ADN ont été étirées sur des lamelles (Genomic Vision COV-002-RUO) à l'aide de l'instrument de peignage moléculaire FiberComb (Genomic Vision MCS-001). Les lames ont ensuite été colorées avec des anticorps détectant CldU (Abcam 6236), IdU (BD 347580) et ADN (Millipore Sigma MAB3034). Ensuite, les lames ont été incubées avec des anticorps secondaires conjugués Cy3, Cy5 ou BV480 (Abcam 6946, Abcam 6565 et BD Biosciences 564879). Enfin, les cellules ont été montées sur des lamelles et imagées en utilisant la microscopie confocale (Leica SP5).